[神州智达]2025年普通高等学校招生全国统一考试(调研卷Ⅰ)生物试题正在持续更新，目前2024届最新高考模拟示范卷答案网为大家整理了相关试题及答案，供大家查缺补漏，高效提升成绩。

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25.（14分）研究发现，N基因表达的N蛋白在维持胚胎十细胞自我更新和多向分化潜能中具有非常重要的作用。为获得N蛋白进行了如下实验。回答下列问题：（1）根据基因数据库中小鼠N基因的序列及质粒载体的图谱，设计一对PCR引物，并在两条引物的5端设计不同的限制酶识别序列，确保构建融合表达载体时为减少对小鼠组织器官的伤害，可提取的DNA作为模板进行PCR扩增，该过程由提供原料和能量。加样时，用移液器将PCR产物和上样缓冲液吹吸混匀，上样缓冲液中含溴酚蓝，其作用是指示电泳的进程，以便适时（2）电泳后可以对琼脂糖凝胶进行，从而达到使PCR产物纯化的目的，再将纯化后的PCR产物和质粒分别进行二，在DNA连接酶的作用下将两者连接起来，构建融合表达载体。（3）在适宜的条件下，将融合表达载体转人大肠杆菌，将转化后的大肠杆菌涂布接种在含抗生素的板培养基上，培养一段时间后，挑取接种到LB液体培养基，在37℃的摇床中振摇培养适宜时间。为快速鉴定是否为阳性菌种，可直接利用作为模板进行PCR，若电泳条带正确，可对PCR产物进行测序，再通过来进一步确定。（4）诱导表达及条件优化。①利用IPTG（诱导剂）对将含有融合表达载体的大肠杆菌进行诱导培养，提取蛋白质进行电泳分析，结果如图甲所示。由图可知，N蛋白的分子量约为kD。63kDM：蛋白Marker；1：大肠杆菌2：未诱导的含空载质粒的菌体26kD3-4：经IPTG诱导的含空载质粒的菌体5-6：经IPTG诱导的含重组质粒的菌体②为优化培养条件，分别加人不同浓度的IPTG进行诱导培养，并在不同时间分别取样检测，结果如图乙、丙所示，说明在条件下，N蛋白的表达量最大。③对菌体进行破碎、离心后，分别收集上清液和沉淀中的蛋白质进行电泳，结果如图丁所示，说明大M:蛋白MarkerM：蛋白MarkerM：蛋白Marker1-2：0mmOl·LIPTG诱导的含重1-6：IPTG诱导不同时间（分别为1-2：菌体诱导后的总蛋白组质粒的菌体0、2、3、4、5、6h）的含重组质3-4：菌体诱导后的上清液3-7：不同IPTG浓度（分别为0.4、粒的菌体5-6：菌体诱导后的沉淀0.6、0.8、1.0、1.5mmol·L）诱导的含重组质粒的菌体第8页共8页市高三教学质量评估